产品描述:甘油三酯由甘油和脂肪酸酯化而成,是血脂的主要成分,也是机体重要的供能物质。高甘油三酯和高胆固醇血症是临床常见的高脂血症,与许多疾病相关。与血浆甘油三酯测定相比,实体组织和细胞的甘油三酯测定并非易事。普利莱组织细胞甘油三酯含量酶法测定试剂盒采用高效能试剂进行组织细胞裂解和甘油三酯抽提,避免了有毒的氯仿甲醇提取、繁杂的氮气吹干和脂质复溶等步骤,优化了GPO Trinder酶学反应组分,使操作步骤简单易行、检测结果更加稳定、灵敏度高,线性范围20-2000umol/L。
产品原理:(1)脂肪酶分解血清中的甘油三酯为甘油;(2)甘油激酶将甘油磷酸化为3-磷酸甘油;(3)3-磷酸甘油被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺,其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围:测定各类动物组织、细胞、酵母、昆虫、斑马鱼和粪便样本的甘油三酯含量。
产品组成:
组份 | 规格 | 储存和效期 | ||
50次 | 105次 | 200次 | ||
裂解液 | 25ml | 50ml | 50ml*2 | 2-8ºC,一年有效 |
R1试剂 | 9ml | 17ml | 33ml | 2-8ºC避光保存,一年有效 |
R2试剂 | 2.5ml | 4.5ml | 8.5ml | 2-8ºC避光保存,一年有效 |
甘油标准品(4mM) | 1ml | 1ml | 1ml*2 | 2-8ºC,一年有效 |
所需设备:酶标仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm,次选530、490nm。
产品说明:
1. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等会干扰测定。肝素和EDTA在抗凝时的用量不会干扰测定。
2. 样本即使保存在-20ºC的环境下,甘油三酯也会自发水解。因此建议样品4ºC保存时间应短于24小时,当-70ºC保存也应不超过1个月。
3. 本产品仅用于科学研究,不得用于临床诊断或治疗。
相关问题及解决方案:
1. 取样:细胞样本的细胞量不要少于106个,否则容易导致结果不准确。组织样本取材时保证位置一致,尽量避开大血管等部位,高脂肪含量样本如肝脏、脂肪组织、脑组织等样本测定请使用E1025-105。
2. 样本处理:细胞、组织样本裂解时可加入蛋白酶抑制剂混合物(P1265)不影响后续测定,需通过预实验确定裂解液加入的比例,使样本中脂质全部溶解后再测定。组织细胞裂解液也可用于Western Blot检测
3. 标准品稀释:标准品稀释可以选择生理盐水、PBS等,采用倍比稀释。建议标准品体积不少于50ul,减小误差,建议制备标准品体积不少于50ul,减小误差。测定样本较多时,先加入甘油三酯检测工作液然后加入标准品、样本,保证反应时间尽量一致。
4. 工作液孵育:尽量选择37ºC水浴或金属浴孵育(尽量避开边缘),不要用37ºC恒温培养箱,其达不到工作液中各类酶反应最适温度,标准曲线偏差较大,往往得不到完美结果。
5. 反应体系的调整:可以在200ul反应体系的基础上,对工作溶液和样本体积进行微调,需注意标准品体积一并调整。不建议减少反应体系,减少反应体系会降低检测精度。
6. 同时用普利莱试剂盒测定TC、TG两个指标时,可以使用TG的裂解液处理一份样本,同时测定TC 、TG,两个指标。
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