定量PCR(Quantitative PCR, qPCR),也称实时PCR(Real-time PCR)或者实时定量PCR,是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性分析。在实时荧光定量PCR反应中,引入了一种荧光化学物质,随着PCR反应的进行,PCR 产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,从而通过荧光强度变化监测产物量的变化。该技术具有特异性强、灵敏度高、污染途径少、检测方法准确等特点,实现了PCR由定性到定量的飞跃,已成为国际公认的核酸定量的标准方法,广泛应用于基因表达丰度、拷贝数等研究及临床疾病检测等许多领域。
普利莱的定量PCR(Quantitative PCR, qRCR)技术服务是采用SYBR Green I荧光染料法或TaqMan荧光探针法对DNA/RNA进行相对定量或绝对定量。相对定量:通过2-ΔΔCt法计算比较目的基因和内参基因(常用GAPDH、β-actin和36B4等)的表达倍数差异进行相对定量;绝对定量:需要先制备标准品,然后在检测目的基因的同时检测标准曲线,通过比对标准曲线对未知浓度的样品进行绝对定量,最终计算出样品中特定核酸的拷贝数、摩尔数或者微克数等。普利莱拥有专业的技术团队,可以针对客户的不同实验目的设计实验方案,提供DNA、mRNA、长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)水平、非编码小RNA(non-coding small RNA, ncsRNA,包括miRNA、piRNA、siRNA、tRF等)相对定量或绝对定量的检测服务,交付真实准确的原始数据和检测报告。客户仅需提供样品和待检测目的基因的信息,我们提供从样品处理到最终的检测报告的全程服务。
相对定量 | 绝对定量 | 定性分析 |
一般用于基因表达研究,通过比较样品中目的基因cDNA的量来研究不同样品间的mRNA表达量情况,内参基因通常选用β-actin或GAPDH, 通过同时对内参基因的实时检测,可以对样品间由于起始样品量不同或者提取RNA 的效率不同造成的RNA 量误差进行校正,在严格意义上实现对RNA 表达量的解析, 一般采用2-ΔΔCt法进行计算。 | 绝对定量需要构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品,使用已知浓度(拷贝数)的标准品制作标准曲线后,可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量或者起始拷贝数的分析。 | PCR反应结束后,PCR产物无需 电泳检测,可以通过荧光定量 PCR 方法,简单快速的对目的基 因进行高特异性、高灵敏度的检 测;同时闭管操作可以有效防止反应产物的污染,广泛应用于致病微 生物检测、微生物品种鉴定以及基因型(SNPs) 解析等方面。 |
服务项目 | 服务内容 | 周期 (工作日) | 价格 |
qPCR相对定量(SYBR Green I法) | 目的基因或内参基因检测 | 2-3周 | 询价 |
qPCR绝对定量(SYBR Green I法) | 4-5周 | ||
qPCR相对定量(TaqMan法) | 3-4周 | ||
qPCR绝对定量(TaqMan法) | 4-5周 | ||
qPCR引物设计合成 | 优化引物设计合成(染料法) | 1周 | 询价 |
Taqman探针设计与合成 | 优化引物/探针设计与合成(探针法) | 1-2周 | 询价 |
定量PCR标准品构建 | 绝对定量 | 1-2周 | 询价 |
定量PCR标准曲线构建 | 绝对定量 | 1周 | 询价 |
其它定量PCR相关技术服务 | 自定义 | 咨询 | 询价 |
服务优势:
1.高品质:拥有专业的技术团队,提供严谨的实验设计,每个样品均进行三次平行实验,免费数据分析,交付原始检测数据和定量PCR检测报告;
2.服务全:基于多年的研发经验,提供从引物和探针设计到相对或绝对定量分析的全套服务,客户可根据实验需要选择SYBR Green I荧光染料法或TaqMan荧光探针法;
3.效率高:成熟稳定的检测体系,多年的定量PCR检测经验,可在最短时间内交付检测结果;
4.仪器好:拥有ABI7500、7900等qPCR仪,通量大,可靠性强。
服务内容:
1.根据目的基因设计引物;
2. RNA抽提;
3. RNA定量及质量检测;
4.逆转录;
5.使用荧光染料SYBR Green法进行实时定量PCR;
6.数据处理;
7.向客户提交数据分析结果与实验报告。
送样要求:
Total RNA/gDNA:50 ng/ul 以上,至少20ul,条带无降解。需低温运输:
细胞: 107以上,需收集细胞沉淀,干冰运输;
细菌/酵母菌:107以上,需收集菌体,完全去除培养液,立即放入液氮中,放-80℃冰箱冻存,干冰运输;
组织:300mg以上,需干冰运输;
血液:>1ml,需干冰运输;
叶片:>100mg,需干冰运输。
公司提供的结果:
(1) 原始数据(excel表);
(2) 实验报告(包括扩增曲线、融解曲线(SYBR Green I 法)、原始数据、标准曲线(绝对定量)、相对定量结果的柱状图等相关信息)