描述:多重荧光免疫组化TSA(Tyramide signal amplification)即酪酰胺信号放大技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。可实现在同一组织切片上多个靶标蛋白共同染色,通过荧光图像分析挖掘组织微环境中的复杂信息,如定量、共表达确定细胞分型、空间关系分析等。反应原理是:荧光标记的酪胺分子在H2O2环境下被HRP催化激活,产生大量酶促反应,使荧光素在抗原-抗体结合部位与组织周围的蛋白残基结合,形成大量的荧光素沉积,实现信号放大。
普利莱TSA系列检测试剂盒基于酪酰胺信号放大技术,可用于相同来源或不同来源抗体的荧光染色,石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片等样本均可。具有灵敏度高、信号稳定、节省抗体、无抗体种属限制、低丰度蛋白也可适用等特点。除试剂盒内提供的荧光染料外,用户也可根据荧光成像系统光源配置选择其他合适的荧光染料进行搭配开展实验。
普利莱TSA系列试剂盒荧光染料信息:
荧光染料类型 | 激发波长/nm | 发射波长/nm | 颜色 |
DAPI | 359 | 457 | 蓝色 |
TSA Tyramide-440 | 434 | 480 | 蓝色 |
TSA Tyramide-488 | 491 | 516 | 绿色 |
TSA Tyramide-555 | 557 | 570 | 橙红 |
TSA Tyramide-594 | 588 | 604 | 红 |
TSA Tyramide-647 | 656 | 670 | 远红光 |
试剂盒组成:
组份 | 100次 | 储存和效期 |
TSA Tyramide-440(500X) | 12. ul | -20℃避光保存,一年有效 |
TSA Tyramide-488(500X) | 12. ul | -20℃避光保存,一年有效 |
TSA Tyramide-594(500X) | 12 ul | -20℃保存,一年有效 |
TSA Tyramide-647(500X) | 12 ul | -20℃保存,一年有效 |
Tyramide 稀释液 | 50ml | 2-8℃避光保存,一年有效 |
免疫荧光抗体洗脱液 | 15ml | 2-8℃保存,一年有效 |
DAPI染色液 | 5 ml | 2-8℃避光保存,一年有效 |
自发荧光淬灭剂 | 5 ml | 室温保存,一年有效 |
抗荧光衰减封片剂 | 2.5 ml | -20℃避光保存,一年有效 |
注意事项:
1. 荧光Tyramide建议稀释比1:500,也可根据实验结果调整稀释比例(调整范围 1:200 - 1:1000)。
2. 如果有些抗体效价高,亲和力较强,不易洗脱彻底,可提高洗涤温度至 50℃ 30min或增加洗脱次数, 即加入抗体洗脱液 37℃
孵育30min后 ,去掉抗体洗脱液,再加入新的抗体洗脱液,继续37℃孵育30min。
3. 抗体洗脱液流动性强,需在操作过程注意切片平放。
4. 为保证抗体洗脱效果和荧光多重标记效果,正式标记前建议分别做各个抗体的TSA单标测试(即一抗—HRP二抗—对应多标中的T
SA),确定每个抗体单标都能得到较理想的阳性结果后再确定多标的抗原修复条件,抗体顺序等。
5. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。
6. 本品仅用于科研,不得用于临床。
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