描述：铁是人体必需的元素之一，对人体的新陈代谢和身体健康具有重要作用，血液中铁的含量不足，就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有的细胞内，各组织、器官包括各内分泌腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁3～5克，大部分都以蛋白质复合物形式存在，极少部分以离子的形态存在。本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细胞铁离子，线性范围5~300uM。产品包括标准品和空白对照。

组成：

1. 细胞裂解液： 20ml

2. 缓冲液： 5ml

3. 检测剂： 3ml

4. 标准品： 1ml

5. 稀释用液： 20ml

储存：4℃保存，6个月有效。

适用范围：该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。

用户自备：4.5%高锰酸钾溶液5ml（4.5%为质量体积比）。

操作步骤：

1. 样品准备（以两百万细胞数为例）：收集细胞，然后用预冷的PBS 洗两遍，将PBS吸弃，加入100-200ul裂解液，剧烈震荡或涡旋20-30S，置于摇床裂解2h，12000rpm 5min 取上清进行后续铁离子浓度测定和蛋白浓度测定。

注意；摇床裂解后，如果样本粘稠，请使用超声破碎仪超声，12000rpm 5min 取上清。

2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将3mM 的标准品母液稀释为：300uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置0浓度对照反应管。

3. 将缓冲液与4.5%高锰酸钾溶液按1:1混匀，称为混液A。

4. 参考下表，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。

5. 混匀，60℃ 孵育1h。

6. 冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。

7. 加入30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育30min，12000rpm 5min 取上清。

温馨提示：如果样本中出现络合物请先震荡混匀，12000rpm 5min 取上清

8. 取200ul或适当体积 于96孔板，在550nm测定吸光度。如果不能测定550nm，也可以在540nm~580nm范围内检测。

9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。

10. 建议用BCA方法（货号P1511）测定步骤1中样本上清中的蛋白浓度，进行铁离子浓度校正。

说明：

1. 本试剂盒不受锰离子、镁离子、镍离子和锌离子等的干扰。
2. 操作过程中，样品与试剂等避免与铁器接触，以防污染。

3. 所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，检测试剂有腐蚀性，请小心操作，若不慎沾到皮肤上请马上用清水冲洗干净。

5. 该试剂盒仅供科学研究使用。