RIPA裂解液（带PMSF） C1055

描述：

RIPA裂解液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用，是常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解液加强型特别适于western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。PMSF能抑制蛋白酶对蛋白的降解。

储存：

RIPA裂解液 100ml 4 ℃保存

PMSF粉末 （100mM） -20℃保存

PMSF溶剂 1ml  -20℃保存

以上组分12个月有效

制备细胞裂解产物（预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀，按1:99比例加入RIPA裂解液中）

1.800g4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV,10⁶cells=~20ml, 10⁷cells =~100mlPCV）；

2.每50-100ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250-500ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

3.12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；

4.假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物（预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀，按1:99比例加入RIPA裂解液中）

1.取50-100mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2.加入0.5-1ml预冷RIPA裂解缓冲液；

3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

4.12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；

5.假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；

6.20％的甘油保存于-70^oC 或-20^oC。

注意：

1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；

3.PMSF溶液易降解，请于-20^oC保存，按比例现用现加。