描述：

支原体特异性酶，可将试剂盒内支原体检测试剂中特有的底物分解同时将 ADP 转换成 ATP，萤 光素酶在 ATP 存在下催化萤光素氧化发出荧光信号，可通过化学发光仪(luminometer)进行测定，以反 应待检样品是否存在支原体污染。试剂盒操作简单，灵敏度高，特异性强，与 PCR 方法相比更准确。

操作步骤 1. 取适量（1 mL 足够）培养 3-6 天的细胞上清，400 g 离心 3 min，去除沉淀少量漂浮细胞或碎 片，取上清立即检测，或者 4℃保存在一周内检测，或者-80℃保存半年内检测；

2. 将所有检测试剂和检测样品均平衡至室温，最适宜的温度为 20-25℃；

3. 在 96 孔检测板（非透明板，建议用专用 96 孔白板）中加入 50 μL 待检测样品、阴性对照（如 无菌水或 PBS）；

4. 加入 50 μL 支原体检测试剂 A，轻柔混匀不要产生气泡，室温（20-25℃）避光放置 5 min。然 后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测，计读数为 A。（请根据仪器灵敏度适当调整相 应的参数，每个孔的检测时间一般为 0.25-1s）；

5. 加入 50 μL 的支原体检测试剂 B，轻柔混匀不要产生气泡，室温（20-25℃）避光放置 10 min。 然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测，计读数为 B。（注：请严格按照加入支原体 检测试剂 B 后 10 min 进行检测，不应提前或延后，否则会影响结果判断）； 6. 计算比值(Ratio)=读值 B/读值 A。 A. 如果 B/A>1.1，说明细胞培养物中存在支原体污染； B. 如果 B/A<0.9，说明细胞培养物中没有支原体污染； C. 如果 B/A 比值在 0.9-1.1 之间，建议继续培养细胞 24-48 h 后，再次检测确定是否存在支原体 污染。如果 B/A 比值仍在 0.9-1.1 之间，则该细胞培养物没有支原体污染，为支原体阴性。

注意事项： 1. 支原体检测试剂 A 中含有萤光素酶，反复冻融会逐渐使其失活，建议第一次解冻后应适当分装保存， 分装容器需洁净无污染。

2. 检测时强烈建议使用白色或者黑色不透光96孔板，使用普通透明96孔板会使得相邻检测孔出现干扰。

3. 人体皮肤表面含有丰富的 ATP，检测时请带好实验手套、口罩，其他耗材也应洁净、无污染，防止外 源引入 ATP 污染。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。