APPLYGEN 预制胶 Tris-Glycine使用说明书

产品简介：APPLYGEN 预制胶 Tris-Glycine是一款安全、快捷、高性能的预制聚丙烯酰胺凝胶，常用于PAGE和Western blot检测。特点如下：

Ø 采用自动化的灌胶生产技术，产品质量好、稳定性高、重复性佳。

Ø 采用玻璃胶板，有效减少蛋白非特异性吸附，使蛋白条带更为敏锐，清晰。

Ø 胶夹打开极为轻松，只需用刀片在胶夹一侧轻轻划一下即可打开。

Ø 兼容市场上主流的mini电泳槽，如Bio-Rad, Invitrogen, 天能和君意东方等

基本信息：

使用说明：

1. 将GLASS Gel Tris-Gly gel预制胶从包装袋中取出。

2. 将预制胶固定在电泳槽中。

3. 准备电泳缓冲液：推荐使用普利莱B1005 10X电泳缓冲液，取50ml母液，加450mL ddH₂O，得到500mL 1X 电泳缓冲液。

4. 内槽加满电泳液，外槽的电泳液最低须加到1/3液面处，最高不可漫过胶板，再缓慢地将梳子拔出。

5. 上样前请使用移液器吸取电泳缓冲液轻轻吹打加样孔，去除加样孔内残余的胶液。

6. 上样：将蛋白样品与5X 变性loading buffer（B1012）进行4：1混合均匀，加热处理。注意枪头不要戳破凝胶，不要过度插入梳孔使胶板变形造成漏液。

7. 电泳条件：180V, 60 min，当溴酚蓝指示带电泳至胶板底部，或实验预定位置时，即可结束电泳。

8. 电泳结束，取出凝胶。用刀在侧边胶处，沿着两片玻璃的缝隙切开封胶材料，即可打开玻璃板，取胶时，需在凝胶和玻璃条之间，沿着玻璃条划一刀，防止取胶时，发生粘连使胶破碎。（使用美工刀时请注意安全）

拆胶：

1.先沿侧边胶处简单划一刀（或先将玻璃板侧边多余封胶材料去除）；

2.用刀在侧边胶处，沿着玻璃板和玻璃条的缝隙切开封胶材料（箭头处），轻轻打开玻璃板；

3.取胶时，需在凝胶和两侧玻璃条之间沿着玻璃条划一刀，防止取胶时发生粘连使凝胶破碎。

产品运输和保存：

1.常温运输，常温保存时应放置于阴凉处，避免温度剧烈变化和阳光直射。

2.4-8℃保存，可以存放12个月。

3.请勿置于0℃以下，凝胶在0℃以下会冻凝，产生气泡和裂纹，凝胶报废。

APPLYGEN 预制胶 Tris-Glycine兼容的电泳槽:

a.Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)

b.Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)

c.Life Technology Novex Mini-Cell (需与特制挡板配合使用，免费提供)

d.北京六一  DYCZ-25E、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF

e.君意东方 JY-SCZ2+

f.天能 VE180

g.或其它胶板宽度在10厘米的电泳槽

在Life Technology Novex电泳槽中的应用：

在Bio-Rad电泳槽中的应用：

Bio-Rad Mini-PROTEAN系列电泳槽的U型密封条顶部有突起结构，而APPLYGEN 预制胶 Tris-Glycine系列预制胶的短玻板是凹形结构，因此该部位是平的，电泳前需将具有突起结构的密封条取出后反过来安装，是平滑面朝外，从而防止漏液（如下图所示）。另有厚度约为0.5mm的塑料垫片，请根据您电泳槽的实际宽度进行相应的增加。

a.将Bio-Rad电泳槽中的U型密封条（如图绿色部分） 拉出，注意这时的密封条两端是有突起的，突起的这面为正面，无突起的为反面。

b.将密封条旋转180度(正面朝里，反面朝外)，重新装回电泳槽中，注意把密封圈周边压实，防止发生漏液。

c.放置好预制胶进行正常的电泳操作即可。

注意事项：

1. 电压为180V电泳时，1块胶的电流在75mA左右，2块胶的电流在150mA左右，随时间增加电流逐步降低。湿转时120V恒压转膜60-90min。

2. 为达到更好的转膜效果，可以根据预制胶上残留的预染marker及膜上的预染marker确定转膜效率，并对转膜条件进行适当调整。目的蛋白的分子量，凝胶浓度及转膜液中的甲醇浓度都会影响转膜效率。 大蛋白尽量选择低浓度的胶。

3. 电泳结束后可以使用Tris-Gly转膜液进行转膜。将凝胶浸泡在转膜液中10-15min, 使凝胶中的缓冲液得到充分平衡，再进行转膜。

4. 上样时枪头不要过度插入梳孔，以免戳破凝胶造成漏液。

5. 仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。