组织细胞亚铁离子含量测定试剂盒 E1046

描述：铁是生物体内重要的金属元素之一，具有重要的生理作用。亚铁离子是血红素和血红蛋白中的关键元素，同时也在许多生化反应中起到重要作用。

试剂盒检测原理：样本中的亚铁离子与探针结合，生成的物质在593 nm波长处有强吸收峰，在一定范围内其光密度值与亚铁离子浓度成线性相关。试剂盒检测范围0.5-50uM，测定亚铁离子含量。

样本适用范围：可测定各类组织、细胞中的亚铁离子含量。

组份：

操作步骤

1. 样品准备：

组织样品制备：

(1) 用含PBS灌流或漂洗组织，去除组织中的血液。

(2) 取约30-50mg新鲜组织，加入300-500μl的组织细胞裂解液，冰浴匀浆或超声裂解（建议功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）。

(3) 4℃、10000g离心10分钟，取上清液。

细胞样品制备：

(1) 收集细胞，按每1x10⁶个细胞加100-200μl的比例加入组织细胞裂解液，冰浴匀浆或超声裂解（建议功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）。

(2) 4℃、10000g离心10分钟，取上清。

2. 试剂盒准备：

2.1 工作液配制：根据实际用量，将检测缓冲液和显色浓缩液按19:1比例混合均匀制备显色工作液。现用现配，当天使用。

2.2 标准品配制： 用标准品保护液将10mM标准品依次倍比稀释为50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78uM。

3. 亚铁离子浓度测定

3.1 按下表进行配制和操作

3.2 反应完成降至室温（约2-3min）后，上机测定，先用标准品保护液+显色工作液的空白管调零，然后于593nm测定各管吸光度值。

4. 数据处理

利用亚铁标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制作标准曲线，并获得横纵坐标之间的函数关系式，得到标准方程y=mx+n，然后将样本OD值带入方程得到样本亚铁浓度a（umol/L）。

组织或细胞样本如需均一化校正时，可以用样本湿重或细胞数进行校正。

注意事项：

1. 选取新鲜样本进行检测，冷冻样本不要超过一个月，解冻后样本或组织匀浆必须当天测定。

2. 若样本测得吸光度值大于标准品最高点吸光度值，需将样本稀释后再进行测定。

3. 初次使用试剂盒时，小体积液体试剂请适当离心后使用。

4. 本产品仅限专业人员用于科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。