碘化丙啶染色液使用说明书   B1070

描述：

碘化丙啶 别名:皮萨草, 英文名称: propidium iodide，CAS号: 25535-16-4, 分子式: C₂₇H₃₄I₂N₄, 分子量: 668.40。 碘化丙啶（PI）是一种溴化乙啶的类似物，可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中释放红色荧光的荧光染料，无碱基特异性。可对DNA染色的细胞核染色试剂。碘化丙啶不能通过活细胞膜，即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染；而坏死细胞由于失去膜的完整性，PI能穿过破损的细胞膜而对核染色，可鉴别死细胞。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。碘化丙啶与双链DNA结合后产生荧光的强度与双链DNA的含量成正比，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1～2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化，导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。本产品为PI水溶液，浓度为1mg/ml。使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。

适用范围：

本品常用于流式细胞仪分析和显微镜观察，检测细胞凋亡或细胞坏死，以及细胞周期的分析。

储存：

-20℃ 避光保存6个月；4℃保存1个月。

组成：

碘化丙啶染色液（1mg/ml） 1ml， 5ml 稀释液 50ml,

染色步骤：

1. 培养细胞染色

（1）染色前取适量PI水溶液加到稀释液中，制备成PI工作液（为20～50μg/ml）。

（2）将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中，37℃培养细胞10-20分钟。

（3）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次，荧光显微镜观察。

2. 固定细胞染色

（1） 单层细胞培养标本或悬浮细胞经4℃预冷70％乙醇或4% 多聚甲醛固定1小时。

（2） 用0.01mol的PBS（pH 7.4）冲洗。

（3） 沥干后加入PI工作液，室温孵育15分钟；细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。

（4） 用于流式细胞仪检测；或冲洗后封片, 荧光显微镜下观察，激发波长为535nm，发射波长为615nm。

染色结果：

荧光显微镜观察，DNA呈红色荧光.

说明：

1.  荧光染料都存在淬灭的问题，建议工作液用前配制；染色后尽快检测。为减缓荧光淬

灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

2. 在获得细胞沉淀的离心过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高

离心力或延长离心时间。

3.  如果检测组织的细胞周期与细胞凋亡，必须把组织制备成单细胞悬液，才可以进

行检测。

1. 凋亡细胞的标志之一是DNA可染性降低。而当DNA含量的降低或者DNA与染料结合

能力下降也会导致DNA可染性降低，在分析的时候应特别注意。

2.  PI对人体有一定刺激性，操作时请小心，以避免直接接触人体或吸入体。

3.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。